L’ensemble des manipulations présentées dans cette page ont été réalisées à l’aide du matériel de la société Bio-Rad
Les observations en microscopie à fluorescence ont été réalisées par M. Christophe Lambert, Ingénieur de Recherche CNRS (IUEM - LEMAR).
Expression du gène de la GFP chez des bactéries E. coli K12
Présentation du plasmide pGLO et de la régulation de l’expression du gène GFP
Bactéries recombinées par le plasmide pGLO :
synthèse de la GFP sur un milieu de culture LB_Ampicilline_Arabinose
Bactéries recombinées par le plasmide pGLO :
absence de synthèse de la GFP sur un milieu de culture LB_Ampicilline
Bactéries témoins non recombinées par le plasmide pGLO :
absence de croissance bactérienne sur un milieu de culture LB_Ampicilline
Bactéries témoins non recombinées par le plasmide pGLO :
croissance bactérienne mais absence de synthèse de la GFP sur un milieu de culture LB
Flacon contenant le plasmide pGLO :
absence d'expression du gène de la GFP
Mise en culture des bactéries dans un milieu liquide nutritif / Témoins
Première étape de purification de la GFP : concentration bactérienne par centrifugation puis mise en œuvre de la lyse bactérienne (lysozyme et congélation)
Deuxième étape de purification de la GFP : séparation des débris bactériens et des protéines bactériennes (dont la GFP) par centrifugation
Troisième étape de purification de la GFP : réalisation d’une chromatographie d’interactions hydrophobes à partir de la solution de protéines bactériennes
Séparation et identification de la GFP par électrophorèse SDS-PAGE
Validation de l’expression de la GFP à l’échelle cellulaire en microscopie à fluorescence
